NARC-1CRISPR激活质粒(h): sc-402445-ACT

PCSK9 编码一种分泌型丝氨酸蛋白酶 NARC-1，是胆固醇稳态的重要翻译后调控因子，其作用机制在于控制肝细胞表面 LDL 受体（LDLR）的丰度。PCSK9 通过促进 LDLR 的内吞及其在溶酶体中的降解，调节受体回收并影响脂蛋白摄取，同时与 SREBP 驱动的脂质代谢程序相整合。PCSK9 的表达与活性还与内质网到高尔基体的转运、分泌通路加工以及细胞外受体–配体相互作用动力学相交织。PCSK9 信号失调与血浆 LDL 胆固醇异常及心代谢疾病易感性高度相关，因此也成为研究脂质调控机制时常用的靶点。

NARC-1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PCSK9的表达。

NARC-1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的PCSK9基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于PCSK9转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性NARC-1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的PCSK9位点，并能够研究内源性位点上依赖于NARC-1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PCSK9表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟NARC-1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。