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N-CoRCRISPR激活质粒(m) | sc-422771-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
N-CoRCRISPR激活质粒(m2) | sc-422771-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
小鼠 Ncor1 基因编码 N-CoR(核受体共抑制因子 1),这是一种支架型共抑制蛋白,可组装含 HDAC3 的染色质重塑复合物,从而在核受体以及其他序列特异性转录因子处实施转录抑制。N-CoR 通过调控组蛋白乙酰化水平与染色质可及性,影响谱系决定、炎症相关基因程序和代谢稳态,并整合来自类固醇/甲状腺激素受体、Notch 以及与 NF-κB 相关通路的信号。NCOR1 依赖的抑制功能发生改变与免疫反应失衡、神经发育表型以及代谢与致癌相关的转录状态有关,因此它是表观遗传层面调控细胞身份的关键节点。作为转录网络的保守调控因子,N-CoR 常在巨噬细胞激活、脂肪细胞生物学以及分化相关的染色质转换等研究情境中被广泛探讨。
N-CoR CRISPR激活质粒(m)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Ncor1的表达。
N-CoR CRISPR激活质粒(m)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的Ncor1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于Ncor1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性N-CoR表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的Ncor1位点,并能够研究内源性位点上依赖于N-CoR的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Ncor1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟N-CoR通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。