Myosin VbCRISPR激活质粒(h): sc-403324-ACT

MYO5B 编码肌动蛋白依赖的马达蛋白肌球蛋白 Vb（myosin Vb），是细胞内膜运输的关键调控因子，可协调回收内体的动态变化与极性运输。肌球蛋白 Vb 与 Rab 类小 GTP 酶相互作用，引导囊泡运动与货物递送，从而在上皮细胞中支持顶端–基底外侧极性、紧密连接的维持以及受体回收。MYO5B 依赖的运输过程一旦受损，会扰乱刷状缘的组织结构与膜蛋白定位，而这些过程对肠道上皮稳态至关重要。MYO5B 功能障碍与先天性肠病（如微绒毛包涵体病）及相关的胆汁淤积表型密切相关，因此在研究上皮极性与内体分选方面具有重要意义。

Myosin Vb CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MYO5B的表达。

Myosin Vb CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的MYO5B基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于MYO5B转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Myosin Vb表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的MYO5B位点，并能够研究内源性位点上依赖于Myosin Vb的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MYO5B表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Myosin Vb通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。