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MYH1CRISPR激活质粒(h) | sc-400420-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
MYH1 编码肌球蛋白重链 1(myosin heavy chain 1),是一种快肌型骨骼肌运动蛋白,通过在肌小节内进行 ATP 依赖性的交联桥循环来驱动基于肌动蛋白的收缩。作为粗肌丝的核心组成部分,MYH1 参与肌纤维类型的确定、力量产生以及收缩动力学,并与调控肌原纤维发生、钙离子处理和随活动而改变的代谢适应等通路相整合。肌球蛋白重链表达模式的差异常用于研究骨骼肌分化、重塑,以及对去神经支配或运动模拟信号的反应。肌小节相关基因程序的失调(包括与 MYH1 相关的收缩结构发生改变)也与肌病及更广泛的神经肌肉功能障碍机制研究密切相关。
MYH1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MYH1的表达。
MYH1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的MYH1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于MYH1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性MYH1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的MYH1位点,并能够研究内源性位点上依赖于MYH1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MYH1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟MYH1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。