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MYEOV2CRISPR激活质粒(h) | sc-409378-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
MYEOV2CRISPR激活质粒(h2) | sc-409378-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
COPS9(亦称 MYEOV2)编码一种与 COP9 信号体相关的组分。COP9 信号体是 cullin-RING 泛素连接酶(CRL)的保守调控因子,可通过去 NEDD8 化以及泛素–蛋白酶体通路来精细调控蛋白质周转。通过控制依赖泛素的降解,COPS9/MYEOV2 相关过程会影响细胞周期进程、DNA 损伤应答,以及包括 MAPK 和 NF-κB 相关网络在内的信号转导程序。COP9 信号体活性失调已与多种癌症背景中观察到的蛋白稳态异常和转录重编程相关,因此有必要在增殖与应激适应表型中进一步研究 COPS9/MYEOV2。这些功能使其成为在人类细胞中开展泛素介导调控及通路串扰机制研究的相关靶点。
MYEOV2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性COPS9的表达。
MYEOV2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的COPS9基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于COPS9转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性MYEOV2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的COPS9位点,并能够研究内源性位点上依赖于MYEOV2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在COPS9表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟MYEOV2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。