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MYBBP1ACRISPR激活质粒(m) | sc-422090-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
MYBBP1ACRISPR激活质粒(m2) | sc-422090-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
Mybbp1a 编码小鼠的 MYBBP1A(MYB 结合蛋白 1A),这是一种主要定位于核仁的转录共调节因子,能够将染色质相关信号与核糖体生物发生及细胞周期调控进行整合。据报道,MYBBP1A 可调控与 RNA 聚合酶 I 活性、核仁应激反应以及代谢调控相关的转录程序,从而影响细胞生长与增殖。通过与转录因子及染色质修饰复合物相互作用,MYBBP1A 还可影响调控分化及应激适应性基因表达的通路。MYBBP1A 表达或功能的改变与增殖失衡和基因组维护异常等表型相关,这些现象与癌症生物学以及其他核仁功能和转录稳态受扰的情境密切相关。
MYBBP1A CRISPR激活质粒(m)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Mybbp1a的表达。
MYBBP1A CRISPR激活质粒(m)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的Mybbp1a基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于Mybbp1a转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性MYBBP1A表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的Mybbp1a位点,并能够研究内源性位点上依赖于MYBBP1A的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Mybbp1a表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟MYBBP1A通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。