MRP6CRISPR激活质粒(h): sc-402219-ACT

ABCC6 编码 ATP 结合盒（ATP-binding cassette）转运蛋白 MRP6，这是一种膜外排泵，主要在肝脏和肾脏中表达，负责调控细胞外核苷酸与代谢物的稳态。MRP6 通过控制 ATP 的释放及其后续在细胞外生成焦磷酸盐（pyrophosphate），参与维持矿化平衡与结缔组织完整性，从而将转运体活性与嘌呤能信号以及外核苷酸酶（ectonucleotidase）通路联系起来。ABCC6 的功能缺失或表达降低与异位钙化表型密切相关，包括弹性纤维假黄瘤（pseudoxanthoma elasticum）及相关遗传性矿化障碍。基于这些生物学关联，ABCC6 成为研究全身性钙化调控因子、肝脏转运网络以及细胞外基质重塑机制的一个重要靶点。

MRP6 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ABCC6的表达。

MRP6 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ABCC6基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ABCC6转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性MRP6表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ABCC6位点，并能够研究内源性位点上依赖于MRP6的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ABCC6表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟MRP6通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。