Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
MITF Antibody (D-9): sc-515925. Western blot analysis of MITF expression in non-transfected: sc-117752 (A) and human MITF transfected: sc-113752 (B) 293T whole cell lysates.
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MITF双切口酶质粒(h): sc-400401-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- MITF 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- MITF双切酶质粒（h）和MITF双切酶质粒（h2）编码针对MITF的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：MITF: sc-515925，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
MITF双切口酶质粒(h) | sc-400401-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
MITF双切口酶质粒(h2) | sc-400401-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
小眼畸形相关转录因子（MITF）是一种碱性螺旋–环–螺旋亮氨酸拉链（bHLH-LZ）型调控因子，负责控制黑色素细胞及其他神经嵴来源细胞的谱系决定与稳态维持。它通过结合 E-box 基序来协调转录程序，调控黑色素生成、色素沉着、溶酶体相关细胞器生物发生、增殖、分化与存活，并整合 MAPK/ERK、WNT/β-连环蛋白以及 cAMP/PKA 等信号通路的输入。MITF 还可通过调控自噬及内体-溶酶体相关基因网络，参与细胞应激反应与代谢适应。MITF 活性或表达的失调与色素异常相关，并常在黑色素瘤研究中被重点关注，包括肿瘤细胞状态切换、侵袭以及与耐受/耐药相关的转录程序等。
MITF 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 MITF 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对MITF内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏MITF的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了MITF基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。