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MFSD2CRISPR激活质粒(h) | sc-405672-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
MFSD2A 编码 MFSD2,这是一种钠依赖性的溶血磷脂酰胆碱转运蛋白,可介导二十二碳六烯酸(DHA)跨内皮屏障的摄取,在血脑屏障中作用尤为突出。通过调控脂质内流和膜磷脂组成,MFSD2A 支持神经发育、神经元维持以及屏障完整性,并参与更广泛的脂质转运与代谢稳态通路。MFSD2A 还可抑制脑内皮中的囊泡介导跨胞转运(vesicular transcytosis),将其活性与内皮转运过程的调控及紧密屏障功能联系起来。MFSD2A 表达或功能的改变与神经发育表型及屏障通透性失衡有关,因此与中枢神经系统脂质代谢和内皮生物学研究密切相关。
MFSD2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MFSD2A的表达。
MFSD2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的MFSD2A基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于MFSD2A转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性MFSD2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的MFSD2A位点,并能够研究内源性位点上依赖于MFSD2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MFSD2A表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟MFSD2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。