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Mfn1/Mitofusin 1CRISPR激活质粒(h) | sc-400637-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 **MFN1** 基因编码线粒体融合蛋白 1(Mitofusin 1,Mfn1)。Mfn1 是一种嵌入线粒体外膜的类动力蛋白 GTP 酶,介导线粒体融合并塑造线粒体网络结构。Mfn1 与 **MFN2** 和 **OPA1** 协同调控线粒体嵴结构、线粒体 DNA 维持以及生物能量效率,将融合—分裂平衡与线粒体自噬和凋亡信号联系起来。通过控制细胞器的连通性与分布,MFN1 影响与氧化磷酸化及活性氧(ROS)稳态相关通路中的细胞代谢与应激反应。涉及 MFN1 的线粒体动力学失衡已与神经退行性变、心肌细胞功能障碍及代谢表型相关,提示其在研究线粒体质量控制与疾病机制方面具有重要意义。
Mfn1/Mitofusin 1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MFN1的表达。
Mfn1/Mitofusin 1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的MFN1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于MFN1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Mfn1/Mitofusin 1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的MFN1位点,并能够研究内源性位点上依赖于Mfn1/Mitofusin 1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MFN1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Mfn1/Mitofusin 1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。