Metallothionein 2ACRISPR激活质粒(h): sc-410889-ACT

MT2A 编码金属硫蛋白 2A（metallothionein 2A），这是一种富含半胱氨酸的金属结合蛋白，能够缓冲细胞内锌和铜的水平，螯合镉等有毒重金属，并有助于维持细胞氧化还原稳态。通过调控金属的可利用性，MT2A 会影响金属依赖性的转录程序和抗氧化反应，并与应激信号传导及解毒过程相互交叉。MT2A 的表达可被氧化应激、炎症信号以及金属暴露诱导，从而将其与调控细胞存活及对环境损伤适应的通路联系起来。金属硫蛋白生物学的失衡与多种癌症、神经退行性疾病相关情境以及肝损伤模型中观察到的金属代谢和应激耐受性改变有关，因此 MT2A 是开展金属响应信号机制研究的一个有用节点。

Metallothionein 2A CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MT2A的表达。

Metallothionein 2A CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的MT2A基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于MT2A转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Metallothionein 2A表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的MT2A位点，并能够研究内源性位点上依赖于Metallothionein 2A的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MT2A表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Metallothionein 2A通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。