The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
MCT8双切口酶质粒(h): sc-403824-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- MCT8 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- MCT8双切酶质粒（h）和MCT8双切酶质粒（h2）编码针对SLC16A2的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
MCT8双切口酶质粒(h) | sc-403824-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
MCT8双切口酶质粒(h2) | sc-403824-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
SLC16A2 编码单羧酸转运体 8（MCT8），这是一种高亲和力且高度特异的甲状腺激素转运蛋白，介导三碘甲状腺原氨酸（T3）和甲状腺素（T4）的细胞摄取与外排。通过调控细胞内甲状腺激素的可用性，MCT8 影响甲状腺激素受体信号传导及其下游转录程序，从而控制神经发育、神经元分化和代谢稳态。MCT8 的活性与膜转运过程及内分泌信号相互整合，共同塑造组织特异性的甲状腺激素作用。SLC16A2 的致病性变异与严重的神经发育表型及甲状腺激素分布异常相关，因此它是研究甲状腺激素转运与信号传导机制的重要靶点。
MCT8 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 SLC16A2 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对SLC16A2内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏SLC16A2的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了SLC16A2基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。