MatriptaseCRISPR激活质粒(h): sc-402971-ACT

人类 ST14 基因编码 matriptase（膜结合丝氨酸蛋白酶），这是一种 II 型跨膜丝氨酸蛋白酶，可在上皮表面调控细胞周围的蛋白水解。Matriptase 通过激活前体肝细胞生长因子（pro-HGF）以及其他细胞外或膜相关蛋白等底物，参与蛋白酶级联反应，从而影响上皮屏障稳态、细胞极性以及局部微环境重塑等过程。通过调节细胞外基质（ECM）周转和生长因子可用性，ST14 活性能够调控与增殖、分化和迁移相关的信号通路。Matriptase 的表达或蛋白水解活性失调与上皮相关病理生物学有关，并且在癌症生物学、炎症和组织重塑等研究背景中被频繁关注。

Matriptase CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ST14的表达。

Matriptase CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ST14基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ST14转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Matriptase表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ST14位点，并能够研究内源性位点上依赖于Matriptase的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ST14表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Matriptase通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。