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MATH-2CRISPR激活质粒(h) | sc-404019-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
NEUROD6(MATH-2)是一种基础螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子,在人类神经发育过程中调控神经元谱系承诺、分化与成熟等程序。MATH-2 通过结合 E-box 基序来协调基因表达网络,从而控制神经突起生长、突触功能以及神经元存活,并与塑造大脑皮层与海马回路的发育性转录级联相整合。NEUROD6 的活性与神经元的细胞命运决定及兴奋性相关通路有关,因此对研究神经发育障碍和神经精神疾病生物学机制具有意义。扰动 NEUROD6 调控的转录可能改变神经元身份与连接性,支持其用于在人源神经细胞中构建和模拟基因调控网络。
MATH-2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性NEUROD6的表达。
MATH-2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的NEUROD6基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于NEUROD6转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性MATH-2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的NEUROD6位点,并能够研究内源性位点上依赖于MATH-2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在NEUROD6表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟MATH-2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。