Mast Cell TryptaseCRISPR激活质粒(h): sc-400887-ACT

TPSAB1 编码肥大细胞胰蛋白酶（tryptase-α/β），这是一种分泌型丝氨酸蛋白酶，储存在肥大细胞颗粒中，并在脱颗粒过程中释放。肥大细胞胰蛋白酶参与细胞外基质的蛋白水解性重塑，并可通过蛋白酶激活受体（protease-activated receptors）进行信号传导，从而影响炎症级联反应、白细胞募集以及血管通透性。通过调控细胞因子网络和组织微环境动态，TPSAB1 常被用作免疫学与屏障组织生物学中评估肥大细胞活化程度及其丰度的标志物。肥大细胞胰蛋白酶活性改变以及肥大细胞浸润模式的变化，常见于过敏、哮喘、慢性炎症性疾病、纤维化相关过程以及肿瘤相关炎症等研究领域。

Mast Cell Tryptase CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TPSAB1的表达。

Mast Cell Tryptase CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的TPSAB1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于TPSAB1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Mast Cell Tryptase表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的TPSAB1位点，并能够研究内源性位点上依赖于Mast Cell Tryptase的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TPSAB1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Mast Cell Tryptase通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。