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MASP-2CRISPR激活质粒(h) | sc-402549-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
MASP2 编码甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶 2(MASP-2)。MASP-2 是一种由肝脏产生的蛋白酶:当 MBL、ficolins 等模式识别分子与微生物糖链或发生改变的自身细胞表面结合后,它可启动补体的凝集素途径。MASP-2 被激活后会切割 C4 和 C2,生成 C3 转化酶,从而在先天免疫监视过程中放大调理作用、炎症反应以及后续膜攻击复合体的形成。该途径还会通过补体效应片段及其调控因子与凝血和炎症信号通路发生交叉,进而影响白细胞募集与组织损伤反应。MASP2 活性改变或遗传变异与感染易感性及免疫介导的炎症状态相关,因此可用于研究补体驱动病理机制的相关工作。
MASP-2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MASP2的表达。
MASP-2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的MASP2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于MASP2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性MASP-2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的MASP2位点,并能够研究内源性位点上依赖于MASP-2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MASP2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟MASP-2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。