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MARCOCRISPR激活质粒(h) | sc-402692-ACT | 20 µg | $397.00 |
人类 MARCO(macrophage receptor with collagenous structure,含胶原结构的巨噬细胞受体)是一类 A 型清道夫受体,主要表达于巨噬细胞以及特定的树突状细胞亚群。在这些细胞中,MARCO 介导对广泛多阴离子配体的结合与内吞,包括细菌成分和环境颗粒。通过促进非调理素依赖的吞噬作用和颗粒摄取,MARCO 参与先天免疫监视、抗原处理,并调控由模式识别通路下游引发的炎症信号。MARCO 的表达或活性改变与髓系细胞激活失衡及组织炎症相关,因此常在肺部免疫反应、感染生物学以及肿瘤相关巨噬细胞表型研究中被重点关注。作为一种塑造髓系细胞与微环境相互作用的细胞表面受体,MARCO 对研究宿主—病原体互作、免疫细胞迁移以及炎症性重塑具有重要意义。
MARCO CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MARCO的表达。
MARCO CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的MARCO基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于MARCO转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性MARCO表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的MARCO位点,并能够研究内源性位点上依赖于MARCO的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MARCO表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟MARCO通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。