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MAPK15CRISPR激活质粒(h) | sc-406816-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
MAPK15(也称为 ERK7/ERK8)是一种非典型的丝裂原活化蛋白激酶,可调控与细胞应激反应、增殖控制以及细胞内转运相关的激酶信号。研究显示它参与自噬及纤毛发生相关过程的调节,整合影响细胞周期进程与蛋白质稳态的信号。MAPK15 的活性与 MAPK 信号网络相交织,并可影响依赖磷酸化的转录程序调控与细胞骨架组织。MAPK15 的表达或信号传导失调与异常生长表型相关,并在癌症生物学以及其他涉及信号稳态紊乱的疾病研究中受到关注。
MAPK15 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MAPK15的表达。
MAPK15 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的MAPK15基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于MAPK15转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性MAPK15表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的MAPK15位点,并能够研究内源性位点上依赖于MAPK15的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MAPK15表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟MAPK15通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。