MACC1CRISPR激活质粒(h): sc-404253-ACT

人源 MACC1（metastasis associated in colon cancer 1，结肠癌转移相关基因 1）编码一种转录调控因子，参与调控细胞运动性、侵袭性生长以及细胞存活相关程序。MACC1 与 HGF/MET 信号通路及其下游 PI3K–AKT 和 MAPK 通路活性密切相关，通过协调基因表达变化来支持类似上皮–间质转化（EMT）的表型，并促进细胞骨架与黏附动力学的重塑。MACC1 表达异常已被证实与多种实体肿瘤的进展和转移行为相关，因此可作为研究将生长因子感知与迁移相耦联的转录网络的关键分子节点。基于此，其调控机制及下游靶标常在癌症生物学模型中被深入探究，包括侵袭研究、转移相关转录特征以及信号通路串话等方向。

MACC1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性MACC1的表达。

MACC1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的MACC1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于MACC1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性MACC1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的MACC1位点，并能够研究内源性位点上依赖于MACC1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在MACC1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟MACC1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。