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LRIG2CRISPR激活质粒(h) | sc-404443-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
LRIG2(富含亮氨酸重复序列及免疫球蛋白样结构域蛋白2)是一种单次跨膜蛋白,被认为参与调控细胞表面的受体酪氨酸激酶信号传导,从而影响调节增殖、分化与存活的下游通路。LRIG2 通过其细胞外的 LRR/免疫球蛋白样结构域,有能力塑造生长因子反应的强度与持续时间;在与 EGFR/ERBB 家族相关的信号背景中也已有功能关联的报道。在多种与疾病相关的转录组表达谱中观察到 LRIG2 表达异常,这支持将其作为研究人类细胞中信号失衡、细胞命运控制以及微环境相互作用的机制性关键节点。上述特性使 LRIG2 成为探究膜近端通路调控以及与异常细胞生长相关的基因表达程序的一个重要靶点。
LRIG2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性LRIG2的表达。
LRIG2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的LRIG2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于LRIG2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性LRIG2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的LRIG2位点,并能够研究内源性位点上依赖于LRIG2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在LRIG2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟LRIG2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。