The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
LIGHT双切口酶质粒(m): sc-424539-NIC
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- LIGHT 双切口酶质粒（m）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- LIGHT双切酶质粒（m）和LIGHT双切酶质粒（m2）编码针对Tnfsf14的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
LIGHT双切口酶质粒(m) | sc-424539-NIC | 20 µg | CNY3084.00 |
小鼠 Tnfsf14 编码 LIGHT（TNFSF14），这是一种 TNF 超家族的 II 型膜结合细胞因子，可通过 HVEM（TNFRSF14）和 LTβR（TNFRSF3）传递信号，从而调控免疫细胞活化与组织炎症。LIGHT 会影响依赖 NF-κB 和 MAPK 的转录程序，进而塑造 T 细胞共刺激、树突状细胞功能以及基质细胞与免疫细胞之间的相互作用。在小鼠模型中，LIGHT 信号失调与炎症性病理改变和免疫介导的组织重塑相关，因此可作为研究自身免疫、感染及肿瘤—免疫相互作用的关键机制节点。这些通路使 Tnfsf14 成为解析细胞因子驱动的淋巴组织结构调控与屏障部位免疫的重要靶点。
LIGHT 双切酶质粒（m）由一对匹配的质粒组成，专为在 mouse 细胞系中对 Tnfsf14 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Tnfsf14内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏Tnfsf14的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了Tnfsf14基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。