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LHX2CRISPR激活质粒(h) | sc-401071-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
LHX2(LIM 同源盒 2)是一种核内转录因子,含有 LIM 结构域和同源盒结构域,在发育与组织模式形成过程中调控细胞命运决定。在人类细胞中,LHX2 参与控制增殖、分化以及维持祖细胞样状态的转录程序,并对染色质组织和谱系决定相关的基因网络产生下游影响。其活性与发育信号通路及转录调控回路相互交织,共同塑造器官发生过程,涵盖神经与上皮等多种组织环境。已有报道显示,LHX2 表达失调与多种疾病相关的表达特征有关,因此它是研究异常分化与转录调控机制的一个有用节点。
LHX2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性LHX2的表达。
LHX2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的LHX2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于LHX2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性LHX2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的LHX2位点,并能够研究内源性位点上依赖于LHX2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在LHX2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟LHX2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。