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LCORCRISPR激活质粒(m) | sc-431795-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
Lcor 编码配体依赖性共抑制因子(LCOR),这是一种核内转录共调控蛋白,可与结合于 DNA 的转录因子相互作用,并通过依赖染色质的机制对基因表达进行抑制或调节。在小鼠细胞中,LCOR 与由核受体及其他转录调控因子主导的信号程序相关,影响分化、细胞周期控制以及谱系特异性的转录状态。通过将共抑制活性与表观遗传重塑相整合,LCOR 能够调控参与发育调节和细胞身份维持的通路。LCOR 相关转录网络的失调与疾病生物学有关,因为受体信号与染色质控制的异常会扰乱基因表达程序。
LCOR CRISPR激活质粒(m)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Lcor的表达。
LCOR CRISPR激活质粒(m)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的Lcor基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于Lcor转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性LCOR表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的Lcor位点,并能够研究内源性位点上依赖于LCOR的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Lcor表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟LCOR通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。