KLHDC5双切口酶质粒(h): sc-410067-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- KLHDC5 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- KLHDC5双切酶质粒（h）和KLHDC5双切酶质粒（h2）编码针对KLHL42的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
KLHDC5双切口酶质粒(h) | sc-410067-NIC | 20 µg | CNY3084.00 |
KLHL42 编码 kelch 样家族成员 42（kelch-like family member 42），是一种含 BTB–BACK–Kelch 结构域的蛋白，预测在以 Cullin 3（CUL3）为核心的 E3 泛素连接酶复合物中充当底物适配器，从而参与依赖泛素的蛋白稳态维持。Kelch 样蛋白通过选择性招募蛋白底物进行泛素化并促进其周转，影响细胞骨架组织、细胞应激反应以及信号网络稳态。泛素–蛋白酶体通路的失调与基因组稳定性、细胞周期调控和致癌信号广泛相关，因此 KLHL42 对于研究人类细胞中蛋白质质量控制机制具有意义。对 KLHL42 的研究有助于阐明 BTB–Kelch 适配器如何塑造特定情境下的降解程序及其相关表型。
KLHDC5 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 KLHL42 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对KLHL42内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏KLHL42的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了KLHL42基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。