KIF14CRISPR激活质粒(h): sc-408805-ACT

KIF14 编码一种驱动蛋白家族（kinesin）马达蛋白，定位于有丝分裂纺锤体和中体（midbody），在其中支持染色体分离、纺锤体组织以及胞质分裂。它协调基于微管的运输过程，并与中央纺锤体调控因子发生相互作用，以确保正确的末端切断/分离（abscission）和细胞周期推进。KIF14 表达失调常与增殖性表型和染色体不稳定性相关，提示其与调控有丝分裂准确性和基因组维持的通路有关。因此，KIF14 常用于细胞分裂调控、非整倍体和肿瘤生物学模型研究，以理解驱动蛋白活性改变如何重塑有丝分裂结局。

KIF14 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性KIF14的表达。

KIF14 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的KIF14基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于KIF14转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性KIF14表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的KIF14位点，并能够研究内源性位点上依赖于KIF14的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在KIF14表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟KIF14通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。