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KIAA2022CRISPR激活质粒(h) | sc-415544-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
KIAA2022(亦称 X 连锁智力障碍蛋白 KIAA2022)编码一种在脑内富集的大型蛋白,参与神经元发育与突触功能。尽管其分子互作伙伴尚未被完全明确,研究已将 KIAA2022 与神经突起生长的调控、树突棘形态以及塑造神经元连接的活动依赖性转录程序联系起来。KIAA2022 的基因破坏或功能缺失变异与多种神经发育表型相关,包括 X 连锁智力障碍和与自闭症谱系相关的特征,支持其与调控皮层回路形成及兴奋/抑制平衡的通路密切相关。作为研究靶点,KIAA2022 可用于解析人 iPSC 来源神经元中的基因调控网络,并用于探究将细胞骨架动力学与突触成熟耦联的细胞过程。
KIAA2022 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性KIAA2022的表达。
KIAA2022 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的KIAA2022基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于KIAA2022转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性KIAA2022表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的KIAA2022位点,并能够研究内源性位点上依赖于KIAA2022的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在KIAA2022表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟KIAA2022通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。