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Jagged1CRISPR激活质粒(m) | sc-421197-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
小鼠 Jag1 基因编码 Jagged1,这是一种经典的膜结合型 NOTCH 受体配体,在胚胎发育和成体组织稳态中调控接触依赖性的旁分泌(juxtacrine)信号传导。Jagged1 与 NOTCH 的结合可调控受体的蛋白水解性激活,并启动以下游转录程序为核心的信号输出,其中涉及 HES/HEY 因子,从而影响多种谱系中的细胞命运决定、边界形成以及分化选择。在小鼠中,Jag1 参与血管重塑、神经发生和免疫细胞相互作用;其失调也常被用于建立模型,以研究发育异常以及肿瘤或纤维化信号背景下 Notch 通路活性改变的影响。由于 Jagged1 在细胞表面发挥功能,它同样与配体–受体动力学、内吞依赖的 Notch 激活机制,以及由微环境(niche)介导的祖细胞状态调控等研究密切相关。
Jagged1 CRISPR激活质粒(m)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Jag1的表达。
Jagged1 CRISPR激活质粒(m)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的Jag1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于Jag1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Jagged1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的Jag1位点,并能够研究内源性位点上依赖于Jagged1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Jag1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Jagged1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。