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ITPase慢病毒激活颗粒(m) | sc-421191-LAC | 200 µl | CNY3422.00 |
小鼠 Itpa 编码肌苷三磷酸焦磷酸酶(ITPase),这是一种“核苷酸库净化”酶,能够水解 ITP、dITP 等非经典嘌呤三磷酸,从而防止它们被误掺入 DNA 和 RNA。ITPase 通过限制异常碱基的掺入以及由此引发的错配修复与复制压力,支持增殖组织中的基因组稳定性和忠实转录。该通路受到扰动会加剧核苷酸失衡,增强 DNA 损伤信号,并使细胞对产生脱氨嘌呤的代谢或氧化应激更为敏感。在生物医学研究中,Itpa 常被用于探究核酸质量控制、复制保真性,以及细胞对基因毒性与代谢扰动的应答。
ITPase 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Itpa 表达。
ITPase 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Itpa转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性ITPase表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Itpa 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。