ITFCRISPR激活质粒(h2): sc-416266-ACT-2
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- ITF CRISPER激活质粒（h2）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- ITF CRISPR 激活质粒 (h2)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 ITF CRISPR 激活质粒 (h2) 和 ITF CRISPR 激活质粒 (h22) 编码的 gRNA 分别针对 TFF3 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：ITF: sc-398651，通过WB, IF或者IHC分析
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
ITFCRISPR激活质粒(h2) | sc-416266-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
人类TFF3（trefoil factor 3）基因编码一种分泌型肽ITF（肠三叶因子），它是一种与黏蛋白相关的三叶因子，在肠道及其他黏膜上皮中高表达，通过促进上皮复原、细胞迁移以及损伤邻近区域的修复反应来维持屏障完整性。TFF3/ITF可与黏液成分相互作用，并调控与细胞骨架重塑和细胞生存程序相关的信号通路，包括MAPK/ERK和PI3K/AKT相关过程，从而影响细胞间连接的维持以及对炎症应激的适应。已有研究报道，在黏膜损伤和慢性炎症背景下TFF3表达会发生失调；它也常被用于研究胃肠道疾病以及上皮性癌症，在这些情境中其表达变化可能与分化异常、侵袭以及转移相关表型相关。对TFF3进行基因编辑可用于机制层面解析黏膜修复通路、上皮—免疫串扰，以及分泌因子对类器官、屏障模型和肿瘤微环境模型的贡献。
ITF CRISPR激活质粒（h2）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TFF3的表达。
ITF CRISPR激活质粒（h2）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的TFF3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于TFF3转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性ITF表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的TFF3位点，并能够研究内源性位点上依赖于ITF的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TFF3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ITF通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。