The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
IRP-1双切口酶质粒(m): sc-418946-NIC
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- IRP-1 双切口酶质粒（m）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- IRP-1双切酶质粒（m）和IRP-1双切酶质粒（m2）编码针对Aco1的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：IRP-1: sc-166022，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
IRP-1双切口酶质粒(m) | sc-418946-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
IRP-1双切口酶质粒(m2) | sc-418946-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
小鼠 Aco1 编码铁调控蛋白 1（IRP-1）。IRP-1 是一种具备双重功能的细胞质蛋白，会根据细胞内铁–硫簇状态在乌头酸酶（aconitase）活性与 RNA 结合型调控因子之间切换。在其 RNA 结合形式下，IRP-1 识别靶 mRNA 上的铁响应元件（IRE），通过调节转铁蛋白受体、铁蛋白等转录本来协调铁的摄取、储存与利用。该转录后调控网络与线粒体铁–硫簇生物合成、氧化应激反应，以及缺铁条件下的代谢重编程相互耦联。IRP-1 活性失调会扰乱铁稳态与氧化还原平衡，使 Aco1 成为在模型系统中研究类贫血表型、与神经退行性变相关的铁积累，以及炎症相关代谢应激的重要关键节点。
IRP-1 双切酶质粒（m）由一对匹配的质粒组成，专为在 mouse 细胞系中对 Aco1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Aco1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏Aco1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了Aco1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。