Integrin αIIb/ITGA2B/CD41CRISPR激活质粒(h): sc-400614-ACT

ITGA2B 编码整合素 αIIb（CD41），这是一种在血小板和巨核细胞中富集的黏附受体，可与整合素 β3 形成异源二聚体（αIIbβ3），在血小板聚集中介导与纤维蛋白原和 von Willebrand 因子（vWF）的结合。配体结合后，αIIbβ3 触发“由内而外”和“由外而内”的信号传导，通过涉及 talin/kindlin、Src 家族激酶、FAK、PI3K–AKT 和 MAPK 等通路，协调细胞骨架重塑、黏着斑动态变化以及颗粒分泌。ITGA2B 的表达水平及其在细胞表面的可用性是血小板生成与止血栓形成的关键因素，因此该轴与血小板功能、血管损伤反应以及炎症串扰等研究密切相关。ITGA2B 的失调或遗传性缺陷与血小板黏附和聚集障碍有关，为探究异常出血表型及巨核细胞成熟机制提供了重要切入点。

Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ITGA2B的表达。

Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ITGA2B基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ITGA2B转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Integrin αIIb/ITGA2B/CD41表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ITGA2B位点，并能够研究内源性位点上依赖于Integrin αIIb/ITGA2B/CD41的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ITGA2B表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Integrin αIIb/ITGA2B/CD41通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。