INSR/Insulin ReceptorCRISPR激活质粒(h): sc-400075-ACT

INSR 编码胰岛素受体（insulin receptor），这是一种跨膜受体型酪氨酸激酶，可与胰岛素结合并启动自身磷酸化，进而通过 PI3K–AKT 和 RAS–MAPK 通路触发下游信号传导。这些级联反应共同协调葡萄糖摄取、糖原合成、脂质代谢，以及对细胞生长与存活的更广泛调控，并与 mTOR 和 FOXO 调控的转录程序发生串话。INSR 活性还会影响受体的内吞与回收动态，并通过 IRS 家族等适配蛋白层面调节胰岛素敏感性。INSR 信号失调与胰岛素抵抗及代谢性疾病的发生发展密切相关，同时也与多种组织及肿瘤微环境中观察到的生长信号异常有关。

INSR/Insulin Receptor CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性INSR的表达。

INSR/Insulin Receptor CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的INSR基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于INSR转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性INSR/Insulin Receptor表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的INSR位点，并能够研究内源性位点上依赖于INSR/Insulin Receptor的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在INSR表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟INSR/Insulin Receptor通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。