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IL-22CRISPR激活质粒(h) | sc-403228-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
IL-22CRISPR激活质粒(h2) | sc-403228-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 IL22 基因编码白细胞介素-22(IL-22),这是一种细胞因子,主要由 Th17/Th22 细胞和先天淋巴样细胞产生,并通过上皮和基质细胞区室上的 IL-22R1/IL-10R2 受体复合体进行信号传导。IL-22 可激活 JAK/STAT 信号通路,其中以 STAT3 驱动的转录程序最为突出,调控屏障完整性、抗菌肽表达、急性期反应以及组织修复过程。通过与包括 NF-κB 和 MAPK 在内的炎症通路串扰,IL-22 调节肠道、肺和皮肤的黏膜免疫。IL-22 活性失调与多种炎症性疾病及上皮重塑相关,因此是研究细胞因子驱动的上皮反应的一个重要节点。
IL-22 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性IL22的表达。
IL-22 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的IL22基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于IL22转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性IL-22表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的IL22位点,并能够研究内源性位点上依赖于IL-22的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在IL22表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟IL-22通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。