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IGF2BP3双切口酶质粒(m) | sc-431213-NIC | 20 µg | CNY3084.00 |
Igf2bp3 编码 IGF2BP3,这是一种胚胎期高表达、肿瘤相关的 RNA 结合蛋白,能够识别 m6A 修饰的转录本,并调控 mRNA 的稳定性、定位与翻译,从而塑造转录后层面的基因表达程序。在小鼠细胞中,IGF2BP3 通过调节与生长因子信号、细胞周期控制以及细胞骨架重塑相关的 RNA 调控模块(regulons),支持细胞的增殖与迁移表型。它与发育程序相关,并可在转化/肿瘤化背景下重新表达,因此适用于研究将 RNA 代谢与致癌通路输出相耦联的机制。由此,IGF2BP3 常被用作研究 mRNA 命运决定、应激适应性翻译以及基因表达可塑性的关键节点。
IGF2BP3 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Igf2bp3 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Igf2bp3内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Igf2bp3的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Igf2bp3基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。