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IGF2BP3CRISPR激活质粒(h) | sc-402603-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
IGF2BP3(胰岛素样生长因子2 mRNA 结合蛋白3)是一种肿瘤胎儿型 RNA 结合蛋白,可通过调控 mRNA 的稳定性、定位与翻译来调节转录后基因表达。IGF2BP3 通过与靶转录本结合并参与核糖核蛋白颗粒的形成,影响细胞增殖与迁移程序、细胞周期进程以及应激适应性翻译,并与 IGF 信号输出及更广泛的生长因子响应网络相关联。它还通过识别带有 m6A 标记的 RNA 与表转录组调控发生交互,从而以情境依赖的方式调控转录本命运。IGF2BP3 的异常表达常与肿瘤发生表型相关,在癌症生物学模型中被研究为影响侵袭、转移以及治疗耐受机制的重要因素。
IGF2BP3 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性IGF2BP3的表达。
IGF2BP3 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的IGF2BP3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于IGF2BP3转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性IGF2BP3表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的IGF2BP3位点,并能够研究内源性位点上依赖于IGF2BP3的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在IGF2BP3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟IGF2BP3通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。