HSPA8/HSC70CRISPR激活质粒(h): sc-418508-ACT

HSPA8 编码热休克同源 71 kDa 蛋白（HSC70），这是一种持续表达的 HSP70 家族分子伴侣，通过介导 ATP 依赖性的底物蛋白折叠、再折叠与转运来维持蛋白质稳态。HSC70 参与网格蛋白介导的内吞作用、通过识别 LAMP2A 的伴侣介导自噬，以及与泛素–蛋白酶体系统和应激颗粒动态相关的蛋白质质量控制通路。通过调控新生多肽的处理、细胞器蛋白导入以及伴侣蛋白–共伴侣网络，HSPA8 影响细胞在蛋白毒性与代谢应激下的存活。以 HSC70 为中心的蛋白质稳态失衡与神经退行性疾病、癌细胞的应激适应以及病毒感染生物学有关，因此 HSPA8 是研究应激与转运通路机制的一个有用枢纽节点。

HSPA8/HSC70 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性HSPA8的表达。

HSPA8/HSC70 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的HSPA8基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于HSPA8转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性HSPA8/HSC70表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的HSPA8位点，并能够研究内源性位点上依赖于HSPA8/HSC70的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在HSPA8表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟HSPA8/HSC70通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。