HOSCRISPR激活质粒(h): sc-404203-ACT

FBXW11 编码人类 F-box/WD 重复蛋白 HOS（亦称 β-TrCP2），它是 SCF（SKP1–CUL1–F-box）E3 泛素连接酶复合体中负责底物识别的组分，可引导被磷酸化的调控蛋白经蛋白酶体途径降解。HOS 通过对关键传导介质进行泛素化，影响包括经由 IκB 家族蛋白介导的 NF-κB 信号以及 Wnt/β-连环蛋白调控等通路，从而塑造炎症反应、细胞周期进程与细胞命运决定。FBXW11 活性或底物识别发生改变会扰乱蛋白质稳态与信号强度，使该轴与癌症相关的信号重编程以及免疫/炎症表型联系起来。作为泛素通路中的枢纽因子，FBXW11 常在转录调控、磷酸化依赖性降解子（degron）以及通路串扰等研究情境中被重点关注。

HOS CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性FBXW11的表达。

HOS CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的FBXW11基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于FBXW11转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性HOS表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的FBXW11位点，并能够研究内源性位点上依赖于HOS的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在FBXW11表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟HOS通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。