hnRNP E2CRISPR激活质粒(h): sc-402274-ACT

PCBP2 编码异质性核糖核蛋白 E2（hnRNP E2），这是一种 RNA 结合蛋白，能够识别富含 C 的序列元件，从而协调转录后基因调控。hnRNP E2 会影响 mRNA 的剪接、稳定性、多聚腺苷酸化以及翻译，使细胞能根据各种信号与应激状态来调整蛋白质产出。它还参与核糖核蛋白复合体的组装，并与调控 RNA 代谢和翻译起始的网络发生相互作用。PCBP2/hnRNP E2 活性失调与癌症生物学中的异常基因表达程序、病毒 RNA 的利用以及炎症信号传导等情境有关，因此常被用于研究基因调控机制与细胞状态控制。

hnRNP E2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PCBP2的表达。

hnRNP E2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的PCBP2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于PCBP2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性hnRNP E2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的PCBP2位点，并能够研究内源性位点上依赖于hnRNP E2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PCBP2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟hnRNP E2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。