HEXIM1CRISPR激活质粒(h): sc-402333-ACT

人类 HEXIM1（hexamethylene bis-acetamide inducible 1，六亚甲基双乙酰胺诱导蛋白1）编码一种核内调控蛋白，通过将 P-TEFb（CDK9–Cyclin T）隔离在 7SK snRNP 复合体中来抑制转录延伸，从而限制 RNA 聚合酶 II CTD 的磷酸化以及暂停释放（pause release）。借由对 CDK9 依赖性延伸过程的控制，HEXIM1 影响刺激应答型基因表达程序、细胞周期进程以及与分化相关的转录网络。HEXIM1 表达改变或 7SK/P-TEFb 稳态被破坏，已被关联到增殖与应激适应等情境下出现的转录失调，因此 HEXIM1 是研究“信号输入如何耦联到全基因组转录输出”机制的一个有用节点。研究 HEXIM1 的功能有助于推进对转录调控、染色质相关调节以及由异常延伸动力学驱动的疾病相关通路的探索。

HEXIM1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性HEXIM1的表达。

HEXIM1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的HEXIM1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于HEXIM1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性HEXIM1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的HEXIM1位点，并能够研究内源性位点上依赖于HEXIM1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在HEXIM1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟HEXIM1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。