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HAUSP双切口酶质粒(m) | sc-434244-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
HAUSP双切口酶质粒(m2) | sc-434244-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
小鼠 Usp7 基因编码去泛素化酶 HAUSP,它属于泛素特异性蛋白酶,能够在多种核内信号网络中调控蛋白质稳定性。HAUSP 可调节 p53–MDM2 轴,影响 DNA 损伤应答,并通过去除关键底物上的泛素化来影响细胞周期进程,从而塑造蛋白质稳态与转录程序。它也参与染色质相关过程,并通过对调控因子的去泛素化,与调控凋亡、复制压力以及免疫信号传导的通路相关联。USP7/HAUSP 活性失调常在基因组完整性缺陷和肿瘤相关信号网络的研究中被关注,因此它是开展泛素依赖性调控机制研究的一个重要节点。
HAUSP 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Usp7 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Usp7内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Usp7的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Usp7基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。