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HADHB双切口酶质粒(h) | sc-403234-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
HADHB双切口酶质粒(h2) | sc-403234-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
HADHB 编码线粒体三功能蛋白(mitochondrial trifunctional protein, MTP)的 β 亚基。该蛋白复合体是催化长链脂肪酸 β-氧化关键步骤的核心酶系之一,其中包括长链 3-酮酰基辅酶 A(3-ketoacyl-CoA)硫解酶活性。通过参与线粒体能量代谢,HADHB 有助于维持细胞 ATP 生成与脂质稳态,尤其是在脂肪酸通量较高时。HADHB 功能受损与遗传性线粒体脂肪酸氧化障碍相关,例如线粒体三功能蛋白缺陷和长链 3-羟酰基辅酶 A 脱氢酶缺陷,可表现为代谢失代偿和心肌病。因此,HADHB 被广泛用于研究线粒体功能障碍、氧化应激与脂质驱动的细胞损伤之间的关联通路。
HADHB 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 HADHB 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对HADHB内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏HADHB的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了HADHB基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。