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GTSF1LCRISPR激活质粒(h) | sc-410333-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
GTSF1L(配子体特异因子1样)编码一种小型、在生殖系中富集的RNA结合蛋白,被认为参与转录后基因调控。基于其与GTSF家族蛋白的同源性,GTSF1L与piRNA相关通路有关;这些通路有助于调控转座元件,并在生殖细胞发育过程中维持基因组完整性。相关过程与RNA沉默、染色质调控以及生殖组织中表观遗传稳定性的维持相互交织。生殖系基因组防御程序的失调,以及生殖系因子在体细胞环境中的异常表达,常被研究为导致基因组不稳定性及类似癌/睾丸抗原(cancer/testis antigen)的表达模式的潜在因素。
GTSF1L CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GTSF1L的表达。
GTSF1L CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的GTSF1L基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于GTSF1L转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性GTSF1L表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的GTSF1L位点,并能够研究内源性位点上依赖于GTSF1L的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GTSF1L表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟GTSF1L通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。