GSTT1CRISPR激活质粒(h): sc-408735-ACT

人类 GSTT1 基因编码谷胱甘肽 S-转移酶 θ1（glutathione S-transferase theta 1），这是一种 II 期解毒酶，可催化还原型谷胱甘肽与亲电子化合物的缀合反应，从而维持细胞氧化还原稳态，并增强对外源性化合物及氧化应激的防御能力。GSTT1 的活性参与谷胱甘肽依赖的环境化学物质与内源性脂质过氧化产物代谢，并与调控活性氧（ROS）处理及应激反应信号传导的通路发生交叉。GSTT1 的遗传变异或基因缺失与对毒物诱导损伤的易感性改变以及个体间化学物质代谢差异相关，因此常被作为研究致癌风险修饰因素、炎症过程和药物基因组学反应差异的重要变量。作为一种底物谱较广的胞质酶，GSTT1 也常被用作模型，用于探究解毒能力以及 GST 家族成员之间的代偿性调控。

GSTT1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GSTT1的表达。

GSTT1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的GSTT1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于GSTT1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性GSTT1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的GSTT1位点，并能够研究内源性位点上依赖于GSTT1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GSTT1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟GSTT1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。