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GSTP1CRISPR激活质粒(h) | sc-402084-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
GSTP1 编码谷胱甘肽 S-转移酶 π 1(glutathione S-transferase pi 1),是一种Ⅱ相解毒酶,可催化谷胱甘肽与亲电性化合物发生缀合反应,其中包括反应性代谢产物和脂质过氧化产物。GSTP1 通过调控细胞氧化还原平衡与外源性化合物代谢,影响氧化应激反应、凋亡信号传导以及 MAPK/JNK 通路的调节。GSTP1 表达改变常在化学应激适应和药物代谢研究中被重点关注;此外,GSTP1 的表观遗传调控已被发现与多种组织类型的肿瘤生物学相关。作为与生物标志物相关的解毒基因,GSTP1 常用于致癌过程、炎症以及环境暴露等模型中的研究与检测。
GSTP1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GSTP1的表达。
GSTP1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的GSTP1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于GSTP1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性GSTP1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的GSTP1位点,并能够研究内源性位点上依赖于GSTP1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GSTP1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟GSTP1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。