GSK3 betaCRISPR激活质粒(h): sc-400090-ACT

人类 GSK3B 基因编码糖原合酶激酶 3β（GSK3β），这是一种持续处于活性状态的丝氨酸/苏氨酸激酶，能够整合营养与生长因子信号，从而协调细胞命运决策。GSK3β 是经典 Wnt/β-连环蛋白信号通路的核心负调控因子，同时也参与 PI3K–AKT、胰岛素/糖原代谢、Hedgehog、Notch 以及与 NF-κB 相关的过程，进而影响转录、增殖、凋亡与分化。通过对 β-连环蛋白及多种转录调控因子等不同底物进行磷酸化，GSK3β 还会影响细胞骨架动态、细胞周期控制以及代谢稳态。GSK3B 信号的失调在多种研究背景中均被提示与之相关，包括肿瘤生物学、神经退行性相关通路、炎症以及代谢性疾病模型等。

GSK3 beta CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GSK3B的表达。

GSK3 beta CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的GSK3B基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于GSK3B转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性GSK3 beta表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的GSK3B位点，并能够研究内源性位点上依赖于GSK3 beta的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GSK3B表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟GSK3 beta通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。