GGT5CRISPR激活质粒(h): sc-405055-ACT

人类 GGT5 基因编码 γ-谷氨酰转移酶 5（gamma-glutamyltransferase 5），这是一种细胞表面酶，可水解谷胱甘肽及相关缀合物中的 γ-谷氨酰键，从而支持细胞外谷胱甘肽的周转以及氨基酸的回收利用。通过参与 γ-谷氨酰循环，GGT5 有助于维持氧化还原稳态、保障半胱氨酸供应，并参与谷胱甘肽来源中间体的代谢，进而影响氧化应激信号传导与细胞解毒过程。GGT5 活性已在炎症微环境、脂质与外源性化合物（异生物）代谢以及组织特异性的氧化平衡调控等背景下得到研究，因此在氧化还原状态与谷胱甘肽处理发生紊乱的疾病相关通路中具有重要意义。这些特性使 GGT5 成为解析谷胱甘肽分解代谢如何影响信号传导、代谢适应与细胞应激反应的一个有用关键节点。

GGT5 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GGT5的表达。

GGT5 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的GGT5基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于GGT5转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性GGT5表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的GGT5位点，并能够研究内源性位点上依赖于GGT5的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GGT5表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟GGT5通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。