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GBX2CRISPR激活质粒(h) | sc-404749-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
GBX2(gastrulation brain homeobox 2)编码一种同源盒(homeobox)转录因子,在胚胎早期发生与神经发育过程中调控区域化模式建立以及细胞命运决定。在人类细胞中,GBX2 协调参与神经前后轴(anterior–posterior)分化/指定的转录程序,并与多种发育信号网络相互作用,包括 WNT/β-连环蛋白、FGF 以及对视黄酸反应的通路。已有研究在多种疾病背景下报道 GBX2 表达失调;在这些情况下,发育相关的转录调控异常可能导致异常增殖、分化受阻以及谱系转换。作为一种位于细胞核内、可与 DNA 结合的调控因子,GBX2 常用于研究转录调控回路、染色质状态调控,以及在癌症和干细胞模型中发育基因网络的重编程。
GBX2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GBX2的表达。
GBX2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的GBX2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于GBX2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性GBX2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的GBX2位点,并能够研究内源性位点上依赖于GBX2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GBX2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟GBX2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。