非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
GAPDH双切口酶质粒(h): sc-400002-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- GAPDH 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- GAPDH双切酶质粒（h）和GAPDH双切酶质粒（h2）编码针对GAPDH的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：GAPDH: sc-47724，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
GAPDH双切口酶质粒(h) | sc-400002-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
GAPDH双切口酶质粒(h2) | sc-400002-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
GAPDH 编码甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase），这是一种保守的细胞质酶，催化糖酵解中的关键步骤，通过 NAD⁺/NADH 循环将葡萄糖代谢与 ATP 生成及氧化还原稳态相连接。除代谢功能外，GAPDH 还参与细胞应激反应，包括在氧化或亚硝化条件下对细胞凋亡的调控、RNA 结合以及核内信号传导。作为能量代谢的核心节点，GAPDH 的表达与活性常在缺氧和代谢重编程过程中发生调节，这些过程与肿瘤生物学、神经退行性疾病和炎症状态密切相关。其普遍且较高的基础表达也使 GAPDH 成为基因表达与蛋白质组学流程中常用的内参/参考靶标；在这些应用中，对 GAPDH 的扰动可用于评估归一化偏差与代谢相关的混杂因素。
GAPDH 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 GAPDH 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对GAPDH内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏GAPDH的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了GAPDH基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。