GALR1CRISPR激活质粒(h): sc-404381-ACT

GALR1 编码人源加兰素受体 1（galanin receptor 1），属于视紫红质样 G 蛋白偶联受体（GPCR）家族，可结合神经肽加兰素（galanin），并主要通过 Gi/o 介导信号转导，抑制腺苷酸环化酶，从而调控下游 cAMP/PKA 活性。受体激活会影响神经元兴奋性、突触传递和神经内分泌分泌；此外，其对 MAPK 信号以及细胞内钙离子动态的影响会因细胞环境不同而有所差异。GALR1 参与调控食欲、痛觉（伤害感受）、情绪相关行为以及自主神经功能；加兰素–GALR1 信号的异常也与多种神经与精神相关表型有关。在肿瘤生物学中，已有研究在多种肿瘤情境下观察到 GALR1 的差异表达及 GPCR 通路的重塑，提示其可作为研究信号与转录机制的关键节点。

GALR1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GALR1的表达。

GALR1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的GALR1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于GALR1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性GALR1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的GALR1位点，并能够研究内源性位点上依赖于GALR1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GALR1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟GALR1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。