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GABARAPL2CRISPR激活质粒(h) | sc-403558-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
GABARAPL2(GABA A 型受体相关蛋白样 2)属于 ATG8 家族的泛素样蛋白,可发生脂质化并整合进自噬体膜,在其中支持货物识别、囊泡延伸以及自噬体成熟。它通过与含有 LC3 互作区域(LIR)的适配蛋白以及膜转运调控因子的相互作用,参与包括线粒体自噬(mitophagy)和聚集体自噬(aggrephagy)在内的选择性自噬过程。通过将自噬与内膜系统动力学连接起来,GABARAPL2 影响细胞蛋白稳态与应激适应通路,例如营养感知和溶酶体更新。自噬失调及 ATG8 网络活性异常与神经退行性疾病、肿瘤生物学、感染和炎症信号等广泛相关,因此 GABARAPL2 是在这些研究背景下进行机制研究的一个有用关键节点。
GABARAPL2 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GABARAPL2的表达。
GABARAPL2 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的GABARAPL2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于GABARAPL2转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性GABARAPL2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的GABARAPL2位点,并能够研究内源性位点上依赖于GABARAPL2的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GABARAPL2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟GABARAPL2通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。